Este estudo, in vitro, se propôs a avaliar a prevalência do canal mesiopalatino em raízes mesiovestibulares de primeiros molares superiores mediante cinco métodos de visualização. Foram analisados 73 primeiros molares superiores permanentes. A análise clínica visual da presença do quarto canal foi realizada com o auxílio de uma sonda exploradora endodôntica reta (EXDG16^®) e uma lima manual tipo K #10 (SybronEndo^®). Os elementos dentários que não foram localizados o quarto canal passaram para a análise com o auxílio de uma lupa composta (Zeiss^®) com aumento de 2,5 vezes e aqueles dentes em que não foram encontrado o quarto canal passaram para o exame com microscópio clínico operatório (OPTO^®) com magnificação de 20 vezes, ambos receberam o auxílio da sonda exploradora e da lima.  A seguir, foi realizada uma radiografia periapical dos dentes em que ainda não foram localizados o canal mesiopalatino para observar a presença ou não do quarto canal. Após, os dentes em que ainda não foram localizados o referido canal foram escaneados utilizando o equipamento de microtomografia (SkyScan^®), a 100 kV e 100 µA, com uma resolução isotrópica de 16 µm. O canal mesiopalatino foi localizado em 70 dentes (95,8%), sendo que em apenas 3 dentes não foi identificado. O método visual na procura do quarto canal apresenta limitações, enquanto que a lupa composta, a microscopia clínica operatória, as radiografias e a microtomografia computadorizada são métodos mais eficientes para a localização do quarto canal em primeiros molares superiores.