As salmonelas são bactérias patogênicas que causam doenças no homem e em animais domésticos. Estas bactérias são gram negativas, possuem formato de bastão e pertencem ao gênero Salmonella, família Enterobacteriaceae. Os isolados são normalmente classificados em sorotipos, conforme combinações de antígenos de superfície somáticos (O) e flagelares (H). A ocorrência dos sorotipos de Salmonella varia entre localidades, regiões e países. Portanto, a identificação do sorotipo é importante na compreensão da epidemiologia da Salmonella, fornecendo informações essenciais sobre a distribuição geográfica e disseminação temporal de linhagens desta bactéria. A análise do sorotipo também é importante para a caracterização de doenças, na medida em que a grande maioria das infecções severas são causadas por sorotipos específicos, como Enteritidis, Typhimurium e Heidelberg. A detecção de Salmonella é realizada pelo isolamento bacteriano e caracterização bioquímica. A identificação de sorotipos necessita de ensaios com reagentes (anti-soros) específicos. Metodologias moleculares podem ser utilizadas na detecção de Salmonella e dos sorotipos. O presente trabalho objetivou estabelecer uma metodologia de sequenciamento de região genética (operon rrnH) para identificação de sorotipos de Salmonella. Foram obtidos 57 isolados de Salmonella de diferentes sorotipos. O DNA destes isolados foi submetido à amplificação de região intergênica do operon rrnH por PCR. Os amplicons foram avaliados por eletroforese em gel de poliacrilamida e após submetidos ao sequenciamento de DNA. A sequência nucleotídica de cada isolado foi avaliada e comparada com sequências do GENBANK através da ferramenta BLASTn. Houve elevada concordância (mais de 90%) entre os resultados de detecção tradicional dos sorotipos e o sequenciamento do operon rrnH.