Nanopartículas (NPs) de óxido de níquel (NiO) são usadas na indústria em eletrodos de bateria, tintas de impressão e aditivos de combustível, aumentando o risco de exposição dos organismos. Do ponto de vista nanotoxicológico, os estudos são escassos em relação à ação genotóxica in vivo das NPs de NiO. Este estudo avaliou a atividade mutagênica e recombinogênica de NPs de NiO no Teste de Mutação e Recombinação Somática (SMART) em células somáticas de Drosophila melanogaster. No bioensaio foram utilizados os cruzamentos padrão e aprimorado, sendo as moscas do aprimorado mais sensíveis à detecção de genotoxinas de ação indireta. Os resultados do cruzamento padrão apontaram para um aumento significativo na indução de clones mutantes em asas de moscas expostas a todas concentrações testadas. Nas moscas do cruzamento aprimorado, observou-se aumento significativo na indução de clones mutantes apenas em indivíduos expostos à maior concentração testada, de 21 mg/mL. A análise dos indivíduos heterozigotos para o cromossomo TM3 revelou que a recombinação somática foi o principal mecanismo indutor das lesões. O teste demonstrou-se eficiente na detecção de NPs de NiO como potencial genotoxina. A avaliação de diferentes parâmetros genéticos faz-se necessária para caracterizar o perfil mutagênico das NPs de NiO com o objetivo de contribuir para uma melhor avaliação de risco quanto a utilização de NPs metálicas.