A hepatite C apresenta elevado impacto na saúde pública global. Em 2017, o Ministério da Saúde lançou a atualização do Protocolo Clínico e Diretrizes Terapêuticas para Hepatite C, com novas terapêuticas viabilizadas pelo Sistema Único de Saúde (SUS). Entre os fármacos disponíveis no SUS, encontramos o sofosbuvir (SOF), que é um medicamento antiviral de ação direta, que atua diretamente nos processos de replicação do vírus da hepatite C. O presente estudo objetiva avaliar a toxicidade genética do medicamento SOF. A genotoxicidade foi analisada empregando o teste de micronúcleo in vitro com bloqueio da citocinese (CBMN) utilizando a linhagem celular humana de carcinoma hepatocelular HepG2. Foram avaliados os seguintes parâmetros: eventos citotóxicos, cinética celular e os danos cromossômicos. As células HepG2 foram expostas a um tratamento com SOF durante 24 horas, nas concentrações 0,011, 0,023, 0,047, 0,094, 0,188, 0,377, 0,755 e 1,511 mM. Os resultados observados em nosso estudo demonstraram que os tratamentos com SOF não aumentaram a frequência de dano cromossômico e não reduziram os valores do Índice de Citotoxicidade da Divisão Nuclear (NDCI), independentemente da concentração. Em conclusão, a exposição das células HepG2 ao SOF não induziu citotoxicidade, dano cromossômico ou alterações genômicas complexas, independentemente das doses utilizadas. Considerando a grande importância dos regimes de tratamento baseados em SOF na terapia de HCV, nossos resultados são relevantes na medida em que demonstram o perfil de segurança genotóxica do SOF.